生物小白的入门必修课（1）| 细胞培养的基本概念、设备及试剂
2024-08-22 来自: 长沙东晟生物技术有限公司 浏览次数:68
细胞培养同学们应该都很熟悉，无论有没有深入学过想必大家看到这个词都能说出一二三
，那么了解细胞培养可不能只停留在概念名称阶段，本期我们就来聊一聊细胞培养的知识，包括细胞培养的基本概念、需要的设备及试剂、操作流程以及其他相关知识。
now，开始学习！
Q：什么是细胞培养？
细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一 定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。
Q：细胞是什么？
细胞是组成生物体的基本单位，生物体由各种类型的细胞组成。
Q：为什么要进行细胞培养？
Q：细胞培养有哪些相关设备？
Q：细胞培养常用的试剂？
Q:培养基作用？
细胞培养基主要是包括一些盐及细胞生存所需的必要营养物质，可以在体外培养细胞使其维持正常的生理状态。
(1)BME，适用于二倍体或原代哺乳动物细胞培养的动物细胞培养基。
(2)MEM，是动物细胞培养中的常用的培养基，也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
(3)DMEM，Dulbecco's改良培养基是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基在 MEM 培养基的基础上研制的。浓度高出MEM2~4倍，同时又分为高糖型(低于4500 mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)。
(4)IMDM，为营养非常丰富的培养液，因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。
(5)RPMI-1640培养基。广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
(6)M199，主要用于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。M199可用于培养多种种属来源的细胞，并能培养转染的细胞。
(7)Mccoy‘s5A，主要用于肉瘤细胞的培养，可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
(8)Ham’s F12培养基，可以在加很少血清的情况下应用，特别适合单细胞培养和克隆化培养，是无血清培养中常用的基础培养液。
(9)DMEM/F12，适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1:1结合，称为DMEM/F12培养基，作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
Q：血清的作用？
1.提供生长因子和营养物质：血清中含有多种生长因子、细胞因子和营养物质，可以为细胞提供必需的生长因子和营养物质，促进细胞的生长和增殖。
2.维持细胞形态和功能：血清中的成分可以维持细胞的形态和功能，使细胞保持其特定的形态和表型特征。
3.促进细胞附着和增殖：血清中的成分可以提供细胞所需的黏附分子，促进细胞附着在培养表面，并提供细胞增殖所需的信号分子。
4.抗氧化和抗炎作用：血清中的成分具有抗氧化和抗炎作用，可以保护细胞免受氧化应激和炎症反应的损伤。
胎牛还未接触外界，免疫系统激活最少，血清中所含的抗体，补体等对外来物质排斥最小，对细胞有害的成分最少。
Q：胰蛋白酶作用？
1.胰蛋白酶是一种消化酶，可分解许多脊椎动物消化系统中的蛋白质，它存在于胰液中。
2.质膜上的蛋白质负责多种功能，这些功能对于维持细胞的正常生理活动至关重要。
3.一些质膜蛋白（如钙粘蛋白家族）是粘附蛋白，可作为锚，将细胞骨架蛋白连接到细胞外基质。这有助于细胞粘附和细胞迁移。
4.在细胞培养物中，可以将胰蛋白酶添加到培养基中，通过消化粘附蛋白从培养皿表面释放贴壁细胞。
5.胰蛋白酶还通过消化粘附蛋白从聚集体中释放细胞。
6.EDTA也与胰蛋白酶一起添加到细胞培养物中，以螯合培养基中的二价离子。钙和镁离子可能抑制胰蛋白酶的作用。
7.最终，胰蛋白酶有助于从细胞培养物中获得单个细胞，促进细胞的下游处理。
Q：抗生素的作用机理？
1.阻碍细菌细胞壁的合成，导致细菌在低渗透压环境下膨胀破裂死亡。哺乳动物的细胞没有细胞壁，不受这类药物的影响。
2.与细菌细胞膜相互作用，增强细菌细胞膜的通透性、打开膜上的离子通道，让细菌内部的有用物质漏出菌体或电解质平衡失调而死。
3.与细菌核糖体或其反应底物（如tRNA、mRNA）相互作用，抑制蛋白质的合成，这意味着细胞存活所必需的结构蛋白和酶不能被合成。
4.阻碍细菌DNA的复制和转录，阻碍DNA复制将导致细菌细胞分裂繁殖受阻，阻碍DNA转录成mRNA则导致后续的mRNA翻译合成蛋白的过程受阻。
常用抗生素：
青霉素+链霉素，俗称“双抗”：预防细菌污染，降低污染率。
两性霉素B：预防真菌污染。
在线客服
